HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG BỘ NHUỘM GRAM
Thuốc thử được cung cấp
| Thuốc thử | Thành phần | Số lượng | Điều kiện bảo quản |
| Nhuộm Gram | Crystal Violet | 100mL/chai x 1 | Nhiệt độ phòng |
| Lugol | 100mL/chai x 1 | Nhiệt độ phòng |
| Alcohol 95% | 100mL/chai x 1 | Nhiệt độ phòng |
| Safranine | 100mL/chai x 1 | Nhiệt độ phòng |
Phương pháp thực hiện thử nghiệm
- Làm một phết bệnh phẩm hoặc vi khuẩn trên một lame sạch. Để khô tự nhiện và cố định bằng cách hơ nóng qua ngọn lửa của đèn cồn.
- Nhỏ vài giọt Crystal Violet cho phủ đều trên bề mặt phết nhuộm và để yên trong vòng 1 phút
- Rửa nhanh bằng nước.
- Nhỏ và giọt Lugol cho phủ đều trên bề mặt phết nhuộm và để yên trong vòng 1 phút
- Rửa nhanh bằng nước.
- Tẩy màu bằng cách nghiên lame và nhỉ từ từ alcohol lên phết nhuộm, khi giọt alcohol rời khỏi lame không có màu tím thì ngưng ngay.
- Rửa nhanh bằng nước.
- Nhỏ vài giọt Safranine cho phủ đều trên bền mặt phết nhuộm và để yên trong vòng 1 phút
- Rửa nhanh bằng nước.
- Thấm khô phết nhuộm và quan sát dưới kính hiển vi
Biện luận kết quả
- Vi khuẩn Gram (+) bắt màu tím và vi huẩn Gram (-) màu hồng
- Kết quả nhuộm Gram bao gồm: (1) tính chất Gram (+/-); (2) hình dạng vi khuẩn (cầu khuẩn, trực khuẩn); (3) cách sắp xếp (chuỗi, chùm, rời rạc…)
Lưu ý khi thực hiện Gram
- Vi khuẩn Gram (+) có thể bị bắt màu hồng nếu: mầm cấy vi khuẩn quá già trên 24 giờ; dung dịch Logol không đạt; tẩy màu quá lâu; tẩy màu bằng alcohol acid
- Vi khuẩn Gram (-) có thể bị bắt màu tím nếu: phết vi khuẩn quá dầy; tẩy màu quá ngắn; alcohol tẩy màu bị pha loãng.
- Sau khi phủ Crystal Violet, không rửa sạch màu thừa trên lame do vậy khi phủ Lugol trên phết nhuộm thì màu Gram thừa sẽ bị tủa lại bám trên bề mặt phết nhuộm. Kết quả khi nhìn qua Kính hiển vi sẽ thấy rất nhiều tinh thể màu Gram bám trên phết nhuộm làm lầm tưởng hình ảnh vi nấm.
Huỳnh Văn Medical - Chuyên cung cấp thiết bị y tế ở TPHCM
Huỳnh Văn Medical là công ty chuyên cung cấp trang thiết bị y tế, hóa chất và vật tư y tế cho các phòng khám, bệnh viện hàng đầu ở Việt Nam
